| 仪器名称：分子相互作用仪 |
品牌型号：Biacore X100 | |
摆放位置：第二理工楼723 | |
负责老师：李楠 第二理工楼709 | |
关键性能参数： 1.样品类型：从低分子量化合物到生物大分子如蛋白质、多肽、DNA、RNA、多糖、脂类分子以及细胞及病毒，包含DMSO溶液，血清及胞浆上清液。 2.结合速率常数（ka）范围：103-107 M-1s-1。 3.解离速率常数（kd）范围：10-5-10-1 s-1。 4.平衡亲和力（KD）：10-4-10-12 M。 5.分子量检测限制：100道尔顿。 6.检测折射率范围：1.33-1.40。 7.响应信号动态范围：1-70000 RU。 8.浓度分析模式：标准曲线法或CFCA法。 9.系统流速：1-100 µL/min。 | |
开机
1.从关机状态开机
（1）启动电脑和打印机，打开Biacore X100主机电源（右后侧下方），待主机面版上TEMP指示灯停止闪烁，即表示温度已稳定。
（2）启动 Biacore X100 Control Software，登入。
（3）待软件和主机建立连接，约30秒。
（4）确认左侧缓冲液瓶已装入新鲜缓冲液且两根缓冲液管均插入瓶中。
（5）确认右侧废液管已插入废液瓶中。
2.从待机状态开机
（1）确认左侧缓冲液瓶已装入新鲜缓冲液且两根缓冲液管均插入瓶中。
（2）确认右侧废液管已插入废液瓶中；启动控制软件并登入。
关机
1.准备一瓶去离子水和一瓶70%乙醇。
2.取出芯片，放入维护芯片。
3.选择Tools—〉Shutdown，根据程序要求完成指令。
4.程序将用去离子水和70%乙醇冲洗流路并排空IFC内的液体，约十分钟。当系统要求打开管道夹时，请打开前部下方面板，翻起管道夹。
5.关闭控制软件和电脑，清空废液瓶。
6.填写仪器使用情况记录本。
注意事项
1.仪器的上机操作需要在管理员老师的指导下完成。
2.缓冲液必须新鲜配制，并且用0.22μm的过滤器过滤去除杂质后才可以使用。
3.去离子水必须用0.22μm的过滤器过滤去除杂质，若使用的纯水仪已含该滤芯，可无需再次过滤。
4.配体和分析物需要为新鲜的、具有活性的样品，尽量现制现用或现买现用。
5.使用后的芯片短期保存用保鲜膜包好置于密闭的塑料袋中，放入4度冰箱冷藏；长期保存将芯片放入装有缓冲液的50ml离心管中，放入4度冰箱保存。
6. 拷取实验数据只能使用空白的光盘或格式化了的U盘。
1. 上机前的前期准备：
（1）CM5 传感芯片。CM5 芯片货号：BR100399（一片装），BR100012（三片装），29149604（十片装）。厂家为Cytiva。
（2）氨基偶联试剂盒（货号：BR-1000-50），厂家为Cytiva。
（3）偶联缓冲液：10mM 醋酸钠 pH4.0（货号：BR-1003-49），10mM 醋酸钠 pH4.5（货号：BR-1003-50），10mM 醋酸钠 pH5.0（货号：BR-1003-51），10mM 醋酸钠 pH5.5（货号：BR-1003-52），厂家为Cytiva。
（4）缓冲液：10 x HBS-EP+ （货号：BR-1006-69），厂家为Cytiva。或者自己配制其他缓冲液，用0.22um的过滤器过滤后使用。
（5）再生溶液Glycine 1.5 （货号：BR-1003-54）。
（6）去离子水（0.22 μm 膜过滤，若纯水仪已含该滤芯，可无需再次过滤直接使用）。
（7）无盖1.5 ml EP 管（货号：BR-1002-87），厂家为Cytiva。或者其他品牌1.5 ml EP管，上机前剪掉盖子。
（8）配体蛋白A：尽量现制现用或现买现用，如果为商业化蛋白粉末，用缓冲液稀释到＞200 μg/ml，并分装后-20℃保存。溶解液尽量不含Tris 等带有伯氨基团的成分。
（9）流动相蛋白B：母液浓度尽量大于1uM，样品体积在200 μL 以上，纯度>80%。
利用Biacore X100 检测蛋白与蛋白结合的亲和力KD 与动力学数据ka，kd。使用CM5 芯片直接偶联蛋白A，蛋白B 作为分析物检测结合的亲和力。若要检测多个蛋白与不同蛋白的互作，可根据蛋白所带的tag，选择偶联相应的捕获分子如tag 标签抗体等，通过捕获法来进行检测。
示例二： Biacore X100 检测蛋白与核酸的相互作用
（1）SA 芯片，货号：BR100398（一片装）、BR100032（三片装），厂家为Cytiva。
（2）缓冲液：10 x HBS-EP+ （货号：BR-1006-69），厂家为Cytiva。或者自己配制其他缓冲液，用0.22um的过滤器过滤后使用。
（3）Condition 缓冲液：含50 mM NaOH 和1M NaCl 溶液，配制200 μL。
（4）Wash 缓冲液：含50%异丙醇、50 mM NaOH、1 M NaCl 溶液，配制200 μL。
（5）去离子水（0.22 μm 膜过滤，若纯水仪已含该滤芯，可无需再次过滤直接使用）。
（6）无盖1.5 ml EP 管（货号：BR-1002-87），厂家为Cytiva。或者其他品牌的1.5m EP管，上机前剪掉盖子。
（7）生物素化修饰的核酸：商业化合成的粉末，用去离子水稀释到100μg/mL，分装保存在-20℃。
（8）蛋白：母液浓度尽量大于1μM，样品体积在200 μL 以上，纯度>80%。（蛋白需要量可能因亲和力高低而异）。
（9）再生溶液：0.5% SDS。
2. 上机的操作建议：
利用Biacore X100 与 SA 芯片检测蛋白与核酸结合的动力学数据ka、kd 和亲和力数据KD。若有大量检测带biotin 标签的样品待检测，可选择Biotin CAPture Kit, Series S（货号：28-9202-34）来进行检测。
示例三： Biacore X100 捕获法检测抗原与抗体的相互作用
1. 上机前的前期准备：
（1）Protein A芯片。Protein A芯片货号：29127557（一片装），29127558（三片装）。厂家为 Cytiva。
（2）缓冲液：10 x HBS-EP+ （货号：BR-1006-69），厂家为Cytiva。或者自己配制其他缓冲液，用0.22um的过滤器过滤后使用。
（3）再生溶液 Glycine 1.5（货号：BR-1003-54）。
（4）去离子水（0.22um 膜过滤，若纯水仪已含该滤芯，可无需再次过滤直接使用）。
（5）无盖1.5 ml EP 管（货号：BR-1002-87），厂家为Cytiva。或者其他品牌的1.5m EP管，上机前剪掉盖子。
（6）抗体 A：浓度>200ug/ml。
（7）抗原 B：母液浓度尽量大于 1uM，样品体积在200WL 以上，纯度>80%。
2. 上机的操作建议：
利用 Biacore X100 检测抗原与抗体结合的亲和力 Ko与动力学数据Ka，Kd。使用 Portein A 芯片，捕获抗体 A，抗原B作为分析物，检测结合的亲和力与动力学。也可使用 CM5+ Human Antibody Capture Kit（货号：29234600）/Mouse Antibody Capture Kit（货号：29215281） 进行捕获法捕获抗体 A，抗原 B 作为流动相进行检测。