仪器名称:电转化仪(真核电转仪) | |
品牌型号:BTX ECM830 | |
摆放位置:第二理工楼725 | |
负责老师:陈红霞+15920316432 | |
关键性能参数: 脉冲方式:方波(适用于动物细胞、组织等) 适配器:电极杯适配器、10cm细胞皿和6孔板适配器;2mm和4mm两个镊子电极 用途:各类悬浮细胞和贴壁细胞的转染,动物组织的基因导入或化合物导入,外泌体的化合物或siRNA导入 |
操作流程:
1、扫码上机,打开仪器后面的总电源;
2、开机自检;
3、根据实验要求选择电机或适配器,将适配器连接线插入仪器前方插孔接通适配器(连接线颜色和仪器上插孔颜色对应,红对红,黑对黑);
4、进入仪器参数界面,选择仪器内已存protocol或打开个人存储的protocol,或新建protocol后根据所选适配器和实验情况设置参数,所有参数都设好后(或者调用的已保存的程序后),点击“Ω”测算电阻,确认无误后,按下“√” 开始实验。
新建protocol参数设置:
1)电压(Voltage/V):根据质粒大小和细胞/外泌体/组织等设置,第一次做或者摸条件建议多设几个电压(细胞可从200V往上设梯度)。
2)脉冲次数(pulses):根据实验设置。
3)Gap:根据电转杯、适配器等选择,1mm、2mm或者4mm,Gap值一定要跟电转杯或适配器相符,不可自行填写。电转杯有1mm、2mm、4mm 三种规格,平皿电极和6孔板电极为2mm,镊子电子配有3mm和7mm两个。
5、当听见“嘀”的一声后,说明放电结束,可进行后续实验。
6、结束后,屏幕会显示放电时的一些实际运行参数,建议记录下每次实验参数。返回ready界面,进行下一个实验。
7、所有实验完成后收起适配器放回原位,关机,扫码下机,如实登记使用情况。
样品准备及注意事项:
1、细胞电转前保证细胞状态最佳,最好选择对数生长期的细胞进行电转实验;
2、细胞电转缓冲液:可购买商品化BTX电转液,也可选择低血清或无血清培养基。(缓冲液要有一定的离子浓度,避免电阻过低导致烧坏仪器);
3、电转杯:实验时电转杯中液体加到一半多一点即可,液体过少会电流过大导致细胞死亡,液体量多电击时有可能溅到盖子上;
4、细胞电转电压根据质粒大小和细胞直径进行调整,质粒越大需要的电压越大,可设梯度,一般在150V-300V之间;
5、若质粒较大、细胞又比较脆弱,可以选择电压相对小一点、脉冲多几次;
6、参数设完点击“Ω”自检时若电阻过大或过小请及时停止实验,调整缓冲液体系;
7、外泌体电转时电压不可过大,建议200V以内;
8、动物组织电转时根据组织大小选择电极。