蛋白纯化仪

1.1 实验前准备

1.1.1 缓冲液准备

所有层析用的缓冲液及样品都需要用 0.22 µm的滤膜过滤，并对缓冲液进行脱气处理（如超声波脱气或者负压脱气）。

1.1.2 开机

注意开机顺序为先开设备，后开软件，即先打开 AKTA GO电源，之后双击打开NICORN7.10 软件，选择用户并输入密码，点击 LOG IN 即可登录。登陆后软件默认自动出现四个软件窗口，打开系统控制 （System Control）窗口，当System States显示为Ready时，说明软件和设备已经连接好。

1.1.3 系统排气泡

在运行实验之前，需要保证所有需要用到的管道中没有气泡，因此需要对系统进行排

气泡。系统排气泡有两种方法：使用 Pump wash 命令进行泵冲洗或泵头手动排气。

1.1.4 连接层析柱

点击工具栏 Manual > Execute Manual Instructions >Alarm, 根据所需要使用的层析柱的参数分别设置 Alarm system pressure 和 Alarm pre column pressure，如选择 0.5 MPa 和 0.5MPa，点击 Insert。

点击工具栏 Manual > Execute Manual Instructions > Flow Path > Column position, 在下拉框中选择柱子需要连接的位置，在 Flow Direction 复选框中选择溶液流向 Down Flow 或者是 Up Flow（一般选择 Down Flow, 自上向下运行），点击 Insert。

点击工具栏 Manual > Execute Manual Instructions >Pumps > System Flow, 输入流速0.5ml/min，点击 Insert。

三组命令均插入后，点击 Execute 开始运行系统。

1.1.5 准备收集器

在收集器盘中按顺序放入一定数量的收集管架，并将收集臂移动置 1 号位，按要求摆

好收集器的位置。

点击工具栏结束图标，结束正在运行的程序，完成准备工作。

1.1.6 层析柱平衡

点击工具栏 Manual > Execute Manual Instructions >Alarm, 根据所需要使用的层析柱的参数分别设置 Alarm system pressure 和 Alarm pre column pressure，如选择 0.5 MPa 和 0.5MPa，点击 Insert。

 点击工具栏 Manual > Execute Manual Instructions > Flow Path > Column position, 在下拉框中选择柱子需要连接的位置，在 Flow Direction 复选框中选择溶液流向 Down  Flow 或者是 Up Flow（一般选择 Down Flow, 自上向下运行），点击 Insert。

点击工具栏 Manual > Execute Manual Instructions >Pumps > System ffow, 输入层析柱推荐的运行流速，点击Insert。

点击工具栏 Manual > Execute Manual Instructions > Monitor > Wavelength 选择需要监测的波长。

点击 Execute 执行所有插入的命令，系统开始对运行，层析柱进行平衡。此时系统运行的流路在 Process Picture 中以绿色标识。

1.1.7 上样及洗脱

在层析柱平衡的过程中，即可为后续上样做准备：

在上样阀上连接 0.5mL 的样品环，用注射器抽取缓冲液后连接到上样阀上，推入缓冲液以清洗样品环，可重复操作几次以彻底洗干净样品环。

样品环洗干净后，用注射器吸取样品（注意：吸取的样品体积必须大于上样环的体积），排除注射器内的气泡后，将注射器连接到上样阀上，并将注射器的样品推入（注意：此时推入的体积必须稍大于上样环的体积，以确保样品环内无气泡，样品推入口注射器保留在上样阀上不能取下）

当系统所有曲线稳定且电导、pH 等参数符合平衡缓冲液条件时，说明已经完成层析柱平衡过程。后续即可开始上样及洗脱过程。待紫外峰与电导峰均出现后，点击工具栏中的结束图标 ，停止实验。

1.1.8 结果分析

切换到 Evaluation 窗口中，选择保存的结果并打开 , 即可对结果进行分析。

1.1.9 层析柱及系统的清洗和保存

实验运行结束后需要清洗层析柱及系统并将二者保存在 20% 乙醇中。

实验运行结束后，将缓冲液的入口放入经脱气的去离子水中，执行 Pump wash 命令进行泵冲洗。推荐的流速为 5mL/min，用水清洗层析柱，运行 5 个柱体积之后，点击工具栏暂停图标暂停。

将缓冲液的入口放入经脱气的 20% 乙醇中，点击继续图标继续运行，再次执行Pump wash 命令。

待泵冲洗结束后，机器会自动继续之前 5 ml/min 的流速，用 20% 乙醇水溶液清洗柱子，运行 5 倍柱体积后，点击工具栏 Manual > Execute Manual Instructions >Pumps > System Flow, 输入层析柱推荐的流速为 0.5mL/min，点击 Insert 并点击 Execute 执行，将层析柱从设备上拆下（拆柱过程需要先拆下端，后拆上端，拧下接头后及时用堵头堵上）。

点击 Manual > Execute Manual Instructions >Flow Path > Outlet valve, 在下拉框中选择出口为 Frac，点击 Insert 之后点击 Execute 执行，以清洗出口阀至收集器的管道。

注意：在清洗此段之前，需要提前将收集器收集滴头端去除放置在废液容器中，避免滴入到收集器内部。运行一段时间（约 2-3min 即可）后点击工具栏的结束图标 ， 结束层析柱及系统的清洗和过程。

1.1.10退出软件并关机

在 UNICORN 软件的任意窗口中点击 工具栏 File > Exit UNICORN 退出软件。之后点击右上角关闭软件，软件后关闭 AKTA GO系统电源即可。